HPLC高效液相色譜柱包含與支持材料鍵合的固定相(通常為多孔硅膠顆粒),以提供較大的表面積。固定相為樣本組分的分離提供了基礎(chǔ)。
樣本的物理化學(xué)特性、固定相化學(xué)組成、流動(dòng)相組成、流速和色譜柱溫度決定了組分通過(guò)色譜柱的速率。研究人員可從各種固定相化學(xué)組成和色譜柱尺寸(如長(zhǎng)度、內(nèi)徑和支持粒徑)中進(jìn)行選擇。
色譜柱類(lèi)型 | 固定相 | 流動(dòng)相 | 應(yīng)用 |
反相 (RP) | 非極性,如 C18 或苯基 | 水和極性有機(jī)溶劑的混合物 | 占 HPLC 分離的大多數(shù) |
正相 (NP) | 極性,如未結(jié)合硅膠 | 低極性有機(jī)溶劑的混合物 | 不溶于水的樣本和異構(gòu)體 |
親水作用 (HILIC) | 極性,如硅膠或酰胺鍵合相 | 水和非極性有機(jī)溶劑的混合物 | 反相液相色譜分析對(duì)高極性樣品的保留較差 |
離子交換 (IEX) | 可離子化基團(tuán) | 通常為鹽加緩沖液的水溶液 | 可離子化樣本和大生物分子 |
離子對(duì) | 非極性反相色譜柱 | 非極性條件加離子配對(duì)試劑 | 反相對(duì)酸或堿的保留較差 |
手性 | 手性基團(tuán),如多糖或環(huán)糊精 | 分析物和 SP 依賴(lài)物,可以是 RP、NP、極性有機(jī)物等 | 對(duì)映體(如外消旋藥物混合物)的分離/純化 |
疏水相互作用 (HIC) | 非極性,短烷基鏈或苯基 | 高鹽緩沖液梯度,非變性條件 | 蛋白質(zhì),通常為抗體 |
體積排阻 (SEC) | 惰性色譜柱,如右旋糖酐聚合物 | 與含水或有機(jī)流動(dòng)相配合使用 | 大生物分子或合成聚合物 |